包括傳統開腹手術、進展到腹腔鏡手術，還有現在最流行的達文西機械手臂，尤其適合治療攝護腺癌。 如申請專利範圍第1項所述的用途，其中該醫藥組成物包含一醫藥學上可接受之賦形劑、載劑、輔劑及/或食品添加劑。 一種戈氏副擬桿菌用於製備一治療肺癌之醫藥組成物的用途，其中該戈氏副擬桿菌的寄存編號為BCRC 。
當使用方式是口服用懸浮液和/或特效藥液時，可組合活性成分與各種甜味劑或風味劑、著色劑或染料一起配方，需要時還可加入乳化劑和/或懸浮劑，以及諸如水、酒精、丙二醇、甘油等稀釋劑。 有鑒於此，此領域亟需一種或一類可用來治療上述具有抗藥性或是對目前化學藥物治療不敏感之癌症的有效藥學化合物。 本實施例比較組所用之迪氏副擬桿菌購自於美國典型培養物保藏中心(American Type Culture Collection，ATCC)。 使用YCFA培養基進行培養，在厭氧室中於37℃在50mL的YCFA培養基中培養24小時。 透過在4℃下以8,000×g離心10分鐘獲得細胞沉澱物。 透過將經培養的細菌細胞懸浮於無氧PBS中(具有最終細胞密度為1×109CFU)來製備用於口服投藥的細胞懸浮液。
化學藥物治療: TWI406658B – 使用異硫氰酸酯類來治療癌症之方法及用途
減輕疼痛藥物的實例包括，但不限於，對乙醯胺基酚(如，對乙醯胺基苯酚)、非固醇類抗發炎藥物(如，水楊酸鹽)及鴉片樣藥物(如，嗎啡及鴉片)。 可以習知的方法從植物、種子或植物萃出物中分離出本發明之6-甲基亞磺醯己基異硫氰酸酯(或I7457)。 含有高量異硫氰酸酯類化合物的植物包括，但不限於，青花菜、芽菜、包心白菜、花椰菜、芥菜子、山葵、白蘿蔔、木瓜籽等。 化學藥物治療2025 本發明之6-甲基亞磺醯己基異硫氰酸酯化合物較佳是自山葵中分離而得。 至於其之衍生物，6-甲基磺醯己基異硫氰酸酯(或I7557)，則可向商業實驗室(如，LKT Laboratories,Inc(St. Paul,Minnesota,USA))購買。
- 細胞週期分析進一步顯示出有至少60%的CML細胞停滯於G2/M期，且處於亞G1(sub-G1)群的細胞族群會隨著I7457或I7557劑量增加而增加(參見表1)。
- 接著，將正常對照組、病理對照組及實驗組小鼠的肺葉固定於10%中性緩衝福馬林(neutral-buffered formalin)中處理，然後以石蠟包埋並切成4μm的厚度。
- 由圖6可見，與正常對照組相較之下，病理對照組的肺腫瘤重量有顯著的增加。
- 細胞週期分析自培養基中取得經培育之細胞(不論是否經過本發明之化合物(即，I7457 or I7557)預先處理)，接著，在4℃下以75%冰冷的酒精處理該些細胞至少經過一夜，使細胞固定。
- 在某些實施方式中，本發明化合物的量至少約為該藥學組合物總重量的1%。
45秒後，加入溶液B(1.3 g的天藍染料、1.4 g的甲基藍、23.38 g的磷酸氫二鈉與6.5 化學藥物治療2025 g的磷酸二氫鉀，皆溶於1,000 ml的蒸餾水中)，其中溶液B與溶液A的添加量為2：1。 「施用(administered、administering或、administration)」一詞在此係指直接施用所述的化合物或組合物，或施用活性化合物的前驅藥、衍生物、或類似物等可於對象體內形成該活性化合物之一相當用量者。 觀察療法：適用於低度或中度風險攝護腺癌，或預期生命少於10～15年者，由於進程較慢，所以醫師會建議積極監控並長期追蹤，等到腫瘤開始進展或惡化再行治療，9成以上病人死因為其他疾病。
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肺癌主要可分為兩種，非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC,NSCLC)以及小細胞肺癌。 在美國三種最常見的非小細胞肺癌為肺腺癌/支氣管肺泡癌(35~40%)、鱗狀細胞癌(25~30%)及大細胞肺癌(10~15%)。 細胞週期分析自培養基中取得經培育之細胞(不論是否經過本發明之化合物(即，I7457 or I7557)預先處理)，接著，在4℃下以75%冰冷的酒精處理該些細胞至少經過一夜，使細胞固定。 之後，在室溫下以A型RNA酶處理細胞約30分鐘，離心後將細胞沉澱物重新懸浮在適量的碘化丙啶(20 μg/ml)中，然後以流式細胞儀測定出不同週期的細胞並計數其數目。 抗病毒藥物的實例包括，但不限於，金剛烷胺、金剛乙胺及其他類似物。
當患者符合高風險攝護腺癌的任何一項指標，代表攝護腺癌的進展可能比較快、轉移機會比較高。 若評估患者健康狀況預計存活期超過五年，便會建議患者積極接受治療。 依據本發明，醫藥組成物可被當作食品添加物，藉由習知方法於原料製備時添加，或是於食品的製作過程中添加，而與任一種可食性材料配製成供人類與非人類動物攝食的食品產品。 以下將進一步說明本發明的實施方式，下述所列舉的實施例係用以闡明本發明，並非用以限定本發明之範圍，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可做些許更動與潤飾，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。
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由圖4可見，在帶有LLC的組別中的多個部位發現了實體瘤(如箭頭所示)。 化學藥物治療 而與病理對照組相較之下，實驗組小鼠的肺腫瘤數目有顯著的減少，而比較組則無此現象。 圖2是戈氏副擬桿菌菌株MTS01在增加帶有肺癌之小鼠的平均存活時間上的效用之數據圖。
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此外，傳統治療方式往往價格昂貴，並非為一般患者所能負擔。 為了解決上述問題，本領域的技術 人員亟需研發出具有治療肺癌功效之新穎醫藥品或食品產品以造福有此需求的廣大族群。 細胞存活率分析的結果顯示，相較於對照組細胞，I7457與I7557在20μM的濃度下能夠有效地減少癌細胞數目至少70%(資料未顯示)。 細胞週期分析顯示以I7457與I7557治療後僅需24小時，即可使至少45%的細胞停滯於G2/M期，且處於亞G1群的細胞數目隨著I7457或I7557的劑量提高而增加(資料未顯示)。
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戈氏副擬桿菌為絕對厭氧細菌，需於37℃之無氧培養箱培養約48小時；其中，該系統包含10%的二氧化碳、10%的氫氣、及80%的氮氣。 該菌之液態培養液為NIH巰基乙酸肉湯(購自BD，美國，編號為225710)，固態培養基則為厭氧血液瓊脂盤(Ana.BAP)(購自啟新生物科技公司，台灣)。 該菌長期保存於-80℃冰箱，保護液為25%之甘油，無須特殊降溫處理，且可經由冷凍乾燥進行保存，以穩定其活性。 化學藥物治療2025 化學藥物治療2025 當可理解上述實施方式與實施例僅為例示，且熟習此技藝者可對齊進行各種修飾。 上文提出之說明書、實施例與資料的目的在於使本說明書的結構完備，並作為實作本發明之例示。
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利用已知可干擾有絲分裂細胞中微管形成的有絲分裂抑制劑－諾可唑(nocodazole，用量100 nM)作為陽性對照組。 總結來看，本實施例的各項結果顯示在經過I7457與I7557治療的抗藥性CML細胞中，有絲分裂現象受到了抑制。 戈氏副擬桿菌菌株MTS01在增加帶有肺癌之小鼠的平均存活時間上的效用評估 本實施例中使用的實驗動物、戈氏副擬桿菌、迪氏副擬桿菌及路易氏肺癌之種類及培育方式是相同於實施例1所記載者。 如請求項15所述之方法，更包含在施用該有效量如請求項9所述之6-甲基磺醯己基異硫氰酸酯或其藥學上可接受鹽類之後，再對該胰臟癌施以放射線處理。 6-甲基磺醯己基異硫氰酸酯(6-methylsulfonylhexyl isothiocyanate)於製造用以治療癌症之醫藥品的用途，上述癌症係選自由胰臟癌、慢性骨髓白血病、非小細胞肺癌及食道癌所組成之群組。 如請求項7所述之方法，更包含在施用該有效量如請求項1所述之6-甲基亞磺醯己基異硫氰酸酯或其藥學上可接受鹽類之後，再對該胰臟癌施以放射線處理。
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格里森分數愈高，代表腫瘤的分化愈差，因此當格里森分數大於8分時，患者較可能出現轉移，存活率也較差。 化學藥物治療 在台灣，約有一半被診斷攝護腺癌的患者屬於第三期或第四期攝護腺癌，可能已有淋巴轉移或遠端轉移的狀況。 當攝護腺癌細胞侵犯到其他組織或器官時，會造成更多不適，例如便秘、下肢無力、水腫，若轉移到脊椎、髖骨、及大腿骨頭等處，則會有明顯的骨頭疼痛，生活品質大打折扣，五年存活率也大幅下降。 依據本發明，該醫藥學上可接受的載劑包含有一選自於由下列所構成之群組中的溶劑：水、生理鹽水、磷酸鹽緩衝生理鹽水、含糖溶液、含有醇的水性溶液，以及它們的組合。
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此外，於製備包含本發明實施例之戈氏副擬桿菌之醫藥組成物時，亦可進一步加入所屬技術領域所熟知之賦形劑、載劑、輔劑及/或食品添加劑。 且其劑型可為但不限於一噴霧氣體、一溶液、一半固態、一固態、一明膠膠囊、一軟膠囊、一錠劑、一口含片、一口香糖及/或一冷凍乾燥粉末製劑。 同時，本發明實施例之戈氏副擬桿菌或包含其他成分的醫藥組成物，亦可進一步用於製備食品、保健食品、膳食補充品或疫苗組合物。 依據本發明的醫藥組成物可包含有一被廣泛地使用於藥物製造技術之醫藥學上可接受的載劑。
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適合以本發明化合物進行治療的癌症是選自胰臟癌、慢性骨髓白血病、及非小細胞肺癌(non-small-cell lung 化學藥物治療2025 carcinoma,NSCLC)。 較佳是使用本發明所揭示的任一種化合物來治療具有抗藥性的癌細胞。 圖3是戈氏副擬桿菌菌株MTS01在增加帶有肺癌之小鼠的體重上的效用之數據圖。
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在某些實施方式中，可經由口服、肌肉注射或靜脈注射而施用至個體身上之本發明化合物的有效用量約為1-100毫克/公斤個體體重。 每天可施用至個體身上之本發明化合物的有效用量約為10、20、30、40、50、60、70、80、90或100毫克/公斤個體體重；較佳是約30-70毫克/公斤個體體重，例如約30、40、50、60、70毫克/公斤個體體重。 在某些實施方式中，所述方法更包含在對該個體施用I7457或是I7557之後，再對該癌症施以放射線處理。 戈氏副擬桿菌菌株MTS01在活體內不同時間點抗肺癌上的效用評估 本實施例中使用的實驗動物、戈氏副擬桿菌、迪氏副擬桿菌及路易氏肺癌之種類及培育方式是相同於實施例1所記載者。 接著，將正常對照組、病理對照組及實驗組小鼠的肺葉固定於10%中性緩衝福馬林(neutral-buffered formalin)中處理，然後以石蠟包埋並切成4μm的厚度。
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如所述，抗藥性是指癌細胞的一種狀態，尤指對單一治療性藥劑發展出抗性。 舉例來說，癌細胞可能會對諸如敏畢瘤、敏克瘤和溫諾平之類的長春花生物鹼類；諸如阿黴素、丹阿黴素及艾達黴素之類的蒽環黴素；微管蛋白安定藥物(紫杉醇)或酪胺酸激酶活性抑制劑(如，達沙替尼、尼祿替尼和伊馬替尼)發展出抗藥性。 目前用來治療癌症的標準方法如下：手術切除、化學藥物治療、放射線治療、免疫治療及生物性治療等；在這些方式中，以手術切除及化學藥物治療最常被採用。 4.荷爾蒙療法：單獨使用僅能壓制癌細胞，無法根治，治療方式包含定期施打荷爾蒙針，一次性切除雙側睪丸，有時會伴隨合併經尿道攝護腺切除術。 化學藥物治療2025 利用放射線照射攝護腺，破壞分裂繁殖的癌細胞，屬於根治性治療，可合併荷爾蒙療法。 化學藥物治療2025 但放射線可能照射到攝護腺周邊組織，常見為膀胱和直腸，傷及膀胱黏膜及直腸黏膜，3～5年後可能大、小便出血。
在本發明的一實施例中，該醫藥組成物的劑型係係一噴霧氣體、一溶液、一半固態、一固態、一明膠膠囊、一軟膠囊、一錠劑、一口含片、一口香糖及/或一冷凍乾燥粉末製劑。 癌細胞能夠迴避細胞凋亡並且具有移動與侵入的能力，因此癌細胞會不斷地增生並且會經由淋巴系統或血管系統轉移至身體的其他部位。 第0圖分別繪示出依據本發明一實施方式，經I7457與I7557處理之抗伊馬替尼之CML K562R細胞中磷酸化組蛋白H3的含量。 化學藥物治療 細胞週期分析進一步顯示出有至少60%的CML細胞停滯於G2/M期，且處於亞G1(sub-G1)群的細胞族群會隨著I7457或I7557劑量增加而增加(參見表1)。
本揭示內容至少有一部分是肇因於一種從山葵中分離出來的異硫氰酸酯類化合物，特別是6-甲基亞磺醯己基異硫氰酸酯及其衍生物，6-甲基磺醯己基異硫氰酸酯，具有抑制癌細胞(特別是，具有抗藥性之癌細胞)生長活性，這樣的發現而發展出來的。 因此，可將這兩種異硫氰酸酯類化合物，作為能治療癌症之醫療藥劑的先導化合物。 使用異硫氰酸酯類來治療癌症之方法及用途 化學藥物治療2025 本揭示內容是有關於某些小分子的新穎用途，特別是異硫氰酸酯類化合物的新穎用途，其可用來製造能治療癌症的醫藥品或藥學組合物。 綜上所述，本發明戈氏副擬桿菌可藉由增加帶有肺癌之個體的存活率、平均存活時間、及體重，並抑制肺腫瘤生長，達到治療肺癌之功效。 戈氏副擬桿菌菌株MTS01在抑制肺腫瘤生長上的效用評估 本實施例中使用的實驗動物、戈氏副擬桿菌、迪氏副擬桿菌及路易氏肺癌之種類及培育方式是相同於實施例1所記載者。
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至於和細胞週期相關的蛋白質，其表現量與上文針對抗藥性CML細胞所述的表現模式相似(資料未顯示)。 細胞存活率分析的結果顯示，與對照組細胞相較之下，I7457與I7557在20 μM的濃度下能夠有效地將癌細胞的數目減少至少50%(資料未顯示)。 細胞週期分析顯示以I7457與I7557治療後僅需24小時，即可使至少50%的細胞停滯於G2/M期，且處於亞G1群的細胞數目隨著I7457或I7557的劑量提高而增加(參見表2)。 此外，相較於對照組細胞(第3A圖)，經過20 μM的I7457(第3B圖)或I7557(第3B圖)處理的CML細胞開始變圓，而使其外觀呈氣球狀，這意味著CML細胞正經歷細胞凋亡與有絲分裂風暴。 對經藥物處理之CML細胞進行α-與β-微管蛋白之染色分析(資料未顯示)以及免疫墨點分析的結果，也進一步證實了上述的有絲分裂事件。 第4圖繪示出利用免疫墨點分析所測定之經藥物處理之CML細胞中β-微管蛋白的含量，由圖中可以看出，與對照組細胞相較之下，利用I7457與I7557治療可分別降低細胞中β-微管蛋白的含量。
在某些實施方式中，本發明醫藥品及藥學組合物中更包含另一種已知可改善癌症治療效果的藥物。 圖6是戈氏副擬桿菌菌株MTS01在抑制肺腫瘤生長上的效用之數據圖。 化學藥物治療2025 由圖6可見，與正常對照組相較之下，病理對照組的肺腫瘤重量有顯著的增加。 然而，與病理對照組相較之下，實驗組的肺腫瘤重量有顯著的降低。
化學藥物治療: TWI406658B – 使用異硫氰酸酯類來治療癌症之方法及用途
在以下實驗中，對C57BL/6J雄性小鼠在尾靜脈中注射路易氏肺癌細胞(1×106細胞)，然後在整個實驗過程中監測腫瘤的生長及體積。 在一較佳實施方式中，可透過本發明兩種化合物之任一種進行治療的癌症是CML，特別是對美國藥物管理局核准之基利克膜衣錠(活性成分為伊馬替尼)具有抗性的CML癌細胞。 在另一實施例中，可透過本發明兩種化合物之任一種進行治療的癌症是胰臟癌，其預斷性差且對於患有局部晚期胰臟癌或是胰臟癌已轉移的患者來說，平均存活時間分別只有約10個月及6個月。 在另一實施例中，可透過本發明兩種化合物之任一種進行治療的癌症是對化學藥物治療不敏感的NSCLC。 在另一實例中，所述癌症為目前仍以手術切除為最主要治療手段的食道癌。
這類醫藥品或藥學組合物較佳是以可有效傳送所述組合物中活性化合物的途徑施用至一哺乳類(較佳是人類)身上適當或可產生欲求效果的位置。 適當的施用途經可以是例如主動或被動地經口、經鼻、經肺或經皮膜等方式；或是以經腸胃外的方式，如直腸栓劑、皮下注射、靜脈內注射、肌肉內注射、鼻腔內、眼用溶液或軟膏。 亦可將本發明之上述醫藥品或藥學組合物製成多種適用於黏膜給藥的劑型，如經頰和/或舌下藥物劑型單元，以遞送藥物穿過口腔黏膜。
