在某些具體實施例中，步驟中的溶液包括體積百分比約17%的1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇（HFIP）和約0.2%的三氟乙酸。 在某些具體實施例中，步驟中的溶液包括體積百分比約25%的2,2,2-三氟乙醇（TFE）和約0.2%的三氟乙酸。 具體實施例 利拉魯肽 34：如具體實施例 29之方法，其中第二次RP-HPLC純化使用包含銨鹽或磷酸鹽之流動相C及包含乙腈之流動相D。 具體實施例 27：如具體實施例 26之方法，其中步驟之溶液包含體積百分比15-20%之1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇與0.1-1%之氟化酸。 具體實施例 26：如具體實施例 22之方法，其中步驟之溶液包含體積百分比5-35 %之氟化醇與0.1-1%之氟化酸。
在一些具體實施例中，流動相C包括20 mM甲酸銨之水溶液；以及pH值為約8.5。 在一些具體實施例中，流動相C包括乙腈與20 mM甲酸銨之水溶液；以及pH值為約8.5，其中水溶液與乙腈之體積比率為95與5。 在一些具體實施例中，流動相D進一步包括15 利拉魯肽 mM甲酸銨之水溶液。 在一些具體實施例中，流動相D進一步包括15 mM甲酸銨之水溶液；以及pH值為約8.3。
利拉魯肽: Q1. 使用Saxenda善纖達（瘦瘦筆）注射時，會不會很疼痛？
如申請專利範圍第1項所述之方法，其中步驟中的鹵化溶劑選自由氟化酸、氟化醇、氯化溶劑及其混合物組成的群組。 在某些具體實施例中，當管柱的直徑和長度為10 mm × 250mm時，第三次純化的流速為4至8 mL/min。 在某些具體實施例中，當管柱的直徑和長度為10 mm × 25 cm時，第一次純化的流速為約4.7 mL/min。
在一些具體實施例中，流動相C包括20 mM磷酸鹽之水溶液。 在一些具體實施例中，第二次RP-HPLC純化使用包括銨鹽或磷酸鹽之流動相C及包括乙腈之流動相D。 在一些具體實施例中，第二次RP-HPLC純化使用包括銨鹽之流動相C及包括乙腈之流動相D。
利拉魯肽: 利拉魯肽
在一些具體實施例中，經純化之利拉魯肽分液之pH值為約7.5至約8.5。 在一些具體實施例中，經純化之利拉魯肽分液之pH值為約8.0至約8.5。 在一些具體實施例中，經純化之利拉魯肽分液之pH值為約7.5至約8.0。 在一些具體實施例中，流動相C之pH值為約7.5至約9.0或約7.5至約8.5。 在一些具體實施例中，流動相C之pH值為約7.5至約8.5。
- 在一些具體實施例中，第二次RP-HPLC純化使用流動相C與流動相D，其各包括銨鹽或磷酸鹽。
- 在一些具體實施例中，第一次RP-HPLC純化使用包括三氟乙酸與水之流動相A及包括三氟乙酸與乙腈之流動相B。
- 在一些具體實施例中，第二次RP-HPLC純化使用包括磷酸鹽水溶液之流動相C且流動相D為乙腈。
- 在一些具體實施例中，步驟之溶液包括體積百分比20-30%之2,2,2-三氟乙醇與0.1-1%之氟化酸。
- 因此，取得鹽交換之利拉魯肽，其中pH值約7.5-8.0，隨後凍乾。
- 司美格魯肽或利拉魯肽係經由兩次連續的RP-HPLC純化及隨後的鹽交換步驟純化，其中pH值在第一與第二次純化步驟中保持恆定。
在一些具體實施例中，流動相C包括乙腈與15 mM甲酸銨之水溶液；以及pH值為約8.3，其中水溶液與乙腈之體積比率為95與5。 利拉魯肽2025 在一些具體實施例中，流動相D進一步包括體積百分比10至60%之量的銨鹽水溶液。 在一些具體實施例中，流動相D進一步包括體積百分比20至60%、30至60%、40至60%或約50%之量的銨鹽水溶液。 在一些具體實施例中，流動相D進一步包括體積百分比約50%之量的銨鹽水溶液。 司美格魯肽或利拉魯肽係經由兩次連續的RP-HPLC純化及隨後的鹽交換步驟純化，其中pH值在第一與第二次純化步驟中保持恆定。 特別的是，本方法在樣本製備步驟中使用鹵化溶劑，其提供粗司美格魯肽或粗利拉魯肽在RP-HPLC純化前之更佳溶解度及適合脫羧反應的環境。
利拉魯肽: Q1. 使用Saxenda善纖達（瘦瘦筆）注射時，會不會很疼痛？
在一些具體實施例中，流動相C包括含有濃度為10至30 mM、15至25 mM或約20 mM之銨鹽或磷酸鹽的水。 在一些具體實施例中，流動相C包括含有濃度為約20 mM之銨鹽或磷酸鹽的水。 在一些具體實施例中，流動相C包括含有濃度為約20 利拉魯肽 mM之銨鹽的水。 在一些具體實施例中，流動相C包括含有濃度為約20 mM之磷酸鹽的水。
利拉魯肽: 利拉魯肽
在一些具體實施例中，經純化之司美格魯肽分液之pH值為約7.5至約8.5。 在一些具體實施例中，經純化之司美格魯肽分液之pH值為約8.0至約8.5。 人類昇糖素類似胜肽-1 (GLP-1)受體協同劑包括艾塞那肽、利拉魯肽、拉糖肽、利司那肽及司美格魯肽。 其中，人類昇糖素類似胜肽-1 (GLP-1)之同系物司美格魯肽(商品名胰妥讚)與利拉魯肽(商品名胰妥善)顯示可作為飲食與運動的添加劑，以改進成人第2型糖尿病的血糖控制。 儘管已有上述純化方法，目前仍需開發更高效並經改良的利拉魯肽純化方法。
利拉魯肽: 利拉魯肽
在一些具體實施例中，流動相D包括15 mM甲酸銨之水溶液與乙腈；以及pH值為約8.3，其中水溶液與乙腈之體積比率為50與50。 利拉魯肽 在一些具體實施例中，流動相C包括15 mM甲酸銨之水溶液。 在一些具體實施例中，流動相C包括15 mM甲酸銨之水溶液；以及pH值為約8.3。
利拉魯肽: Q1. 使用Saxenda善纖達（瘦瘦筆）注射時，會不會很疼痛？
在某些具體實施例中，經純化的利拉魯肽組份的pH值為約7.5至約8.0。 在某些具體實施例中，流動相D的pH值為約7.5至約9.0，或約7.5至約8.5。 在某些具體實施例中，流動相D的pH值為約7.5至約8.5。 在某些具體實施例中，流動相C的pH值為約7.5至約9.0，或約7.5至約8.5。 在某些具體實施例中，流動相C的pH值為約7.5至約8.5。
利拉魯肽: 利拉魯肽
在一些具體實施例中，流動相C包括含有濃度為約15 mM之銨鹽或磷酸鹽的水。 利拉魯肽2025 在一些具體實施例中，流動相C包括含有濃度為約15 mM之銨鹽的水。 在一些具體實施例中，流動相C包括濃度為約20 mM之磷酸鹽的水。
利拉魯肽: Q1. 使用Saxenda善纖達（瘦瘦筆）注射時，會不會很疼痛？
如申請專利範圍第11項或第12項所述之方法，其中該流動相B於線性梯度下由體積百分比5-25%被沖提至80-100%。 如申請專利範圍第11項所述之方法，其中該流動相A及該流動相B各包含體積百分比0.1-1%的三氟乙酸。 如申請專利範圍第9項所述之方法，其中該第一次RP-HPLC純化使用流動相A，其包含三氟乙酸和水，以及流動相B，其包含三氟乙酸和乙腈。 如申請專利範圍第1項所述之方法，其中步驟中的RP-HPLC純化系統包含第一次RP-HPLC純化和第二次RP-HPLC純化；該第一次RP-HPLC純化於pH小於7時進行；該第二次RP-HPLC純化於pH大於7時進行。
利拉魯肽: Q1. 使用Saxenda善纖達（瘦瘦筆）注射時，會不會很疼痛？
在某些具體實施例中，第二次RP-HPLC純化使用流動相C（包括銨鹽水溶液）以及流動相D（包括銨鹽水溶液和乙腈）。 在某些具體實施例中，第二次RP-HPLC純化使用流動相C（包括磷酸鹽水溶液）以及流動相D（乙腈）。 在某些具體實施例中，步驟中的溶液包括體積百分比5-35%的氟化醇和0.1-1%的氟化酸。 在某些具體實施例中，步驟中的溶液包括體積百分比15-20%的1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇（HFIP）和0.1-1%的氟化酸。
利拉魯肽: 利拉魯肽
在一些具體實施例中，流動相E包括濃度為20 利拉魯肽 利拉魯肽2025 mM之磷酸氫二鈉水溶液。 在一些具體實施例中，流動相E包括濃度為20 mM之磷酸氫二鈉水溶液；以及pH值為約8.0。 在一些具體實施例中，流動相E (稱作E1)包括乙腈與濃度為20 mM之磷酸氫二鈉水溶液；以及pH值為約8.0，其中水溶液與乙腈之體積比率為95與5。 在一些具體實施例中，流動相E (稱作E2)包括乙腈與濃度為20 mM之磷酸氫二鈉水溶液；以及pH值為約8.0，其中水溶液與乙腈之體積比率為50與50。 在一些具體實施例中，流動相E包括濃度為20 mM之磷酸氫二鈉之水溶液。
利拉魯肽: 利拉魯肽
在一些具體實施例中，流動相D係以體積百分比0-10%至50-100%之線性梯度沖提。 在一些具體實施例中，依據梯度表2，流動相D係以體積百分比5至70%之線性梯度沖提，其中流動相C為15 mM甲酸銨之水溶液且pH值為約8.3；以及流動相D為乙腈。 在某些具體實施例中，該方法進一步包括： 利拉魯肽2025 使用包含鈉鹽、水和乙腈的流動相E對步驟中的組份進行第三次RP-HPLC純化；並收集組份以取得鹽交換的利拉魯肽。 具體實施例 41：如具體實施例 21之方法，其進一步包含： 將步驟之分液進行第三次RP-HPLC純化，其使用包含鈉鹽、水及乙腈之流動相E；以及收集分液以取得鹽交換之利拉魯肽。 在一些具體實施例中，其進一步包含： 將步驟之分液進行第三次RP-HPLC純化，其使用包含鈉鹽、水及乙腈之流動相E；以及收集分液以取得鹽交換之利拉魯肽。 在一些具體實施例中，流動相B係以體積百分比5-25%至80-100%之線性梯度沖提。
利拉魯肽: Q1. 使用Saxenda善纖達（瘦瘦筆）注射時，會不會很疼痛？
第一與第二次純化之流速取決於RP-HPLC製備管柱之尺寸。 在一些具體實施例中，當管柱之直徑與長度為5 cm x 22 cm至8 cm x 12.6 cm時，第一次純化之流速為約50至200 mL/min。 在一些具體實施例中，當管柱之直徑與長度為5 cm x 22 cm至8 cm x 12.6 cm時，第一次純化之流速為約100至160 mL/min。 在一些具體實施例中，當管柱之直徑與長度為5 cm x 22 cm時，第一次純化之流速為約104 mL/min。 在一些具體實施例中，當管柱之直徑與長度為8 cm x 12.6 cm時，第一次純化之流速為約152 mL/min。
利拉魯肽: Q1. 使用Saxenda善纖達（瘦瘦筆）注射時，會不會很疼痛？
如申請專利範圍第9項所述之方法，其中該第二次RP-HPLC純化使用包含銨鹽或磷酸鹽的流動相C以及包含乙腈的流動相D。 如申請專利範圍第6項所述之方法，其中步驟中的溶液包含體積百分比15-20%的1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇和0.1-1%的氟化酸。 如申請專利範圍第2項所述之方法，其中步驟中的溶液包括體積百分比5-35%的氟化醇和0.1-1%的氟化酸。 在某些具體實施例中，流動相D進一步包括體積百分比10%至60%的銨鹽水溶液。 在某些具體實施例中，流動相D進一步包括體積百分比20%至60%、30%至60%、4%至60%或約50%的銨鹽水溶液。
