腎臟組織病理切片 在慢性腎炎動物的腎臟組織病理切片結果(圖7)中可觀測到本試驗中的腎切除手術成功誘發動物產生腎絲球肥大等慢性腎炎病徵，且此一病徵在經過連續五週的冬蟲夏草發酵液凍乾粉治療周期後，具有明顯改善經腎切除手術造成之腎臟局部性腎絲球硬化症的結果。 一種用於治療慢性腎炎之醫藥組合物，其包含一有效劑量之冬蟲夏草發酵液，其中該冬蟲夏草發酵液係由如申請專利範圍第1項所述之方法製備而得。 用於治療慢性腎炎之醫藥組合物 本發明係關於一種製備冬蟲夏草發酵液的方法；本發明另關於一種用於治療慢性腎炎之醫藥組合物，其包含一有效劑量之冬蟲夏草發酵液。 本發明提供一種用於治療性腎炎之醫藥組合物，其包含一有效劑量之冬蟲夏草發酵液。 試驗材料與方法 測試藥物 冬蟲夏草發酵液凍乾粉於試驗期間內皆保存於-80C冰箱中，每日投藥前始取出以生理食鹽水溶解後進行試驗。
本發明另在5/6腎臟切除引發慢性腎發炎動物模式下，發現可顯著改善慢性腎炎動物之血中尿素氮、血清肌酸酐、尿液尿蛋白/尿液肌酸酐比值及24小時尿蛋白濃度等指標，而有益於健康之調節作用。 數據分析 腎切除手術2025 實驗數據以平均值±標準誤(mean±SEM)方式呈現，並以單向ANOVA方式計算，P值 結果 毒性測試 試驗期間於每週試驗動物體重追蹤記錄(圖2、表2)中，各組別於試驗期間之體重呈現穩定上升之現象；雖然冬蟲夏草發酵液凍乾粉組手術期間(第零天至第十四天)之體重呈現生長停滯之狀態，但手術期過後即呈現穩定上升之體重生長曲線。 此結果顯示冬蟲夏草發酵液凍乾粉對慢性腎炎動物之體重生長曲現並無明顯毒性影響。 腎切除手術 腎切除手術2025 分組後，於七週的試驗期間內每日以口服給予之方式投予給各組動物試驗藥物，並每週持續監控動物體重、血中尿素氮(blood urea nitrogen，BUN)、血清肌酸酐，及收取24小時尿液，追蹤24小時尿液體積、24小時尿蛋白、尿液中蛋白質與肌酸酐比值等腎功能指標；於試驗結束日犧牲動物後摘取腎臟進行後續組織病理切片分析。
- 本發明之冬蟲夏草發酵液可降低血中尿素氮及血清肌酸酐、降低尿液尿蛋白/尿液肌酸酐比值並可減緩24小時尿蛋白濃度攀升。
- 所有動物照護及試驗皆遵循財團法人生物技術開發中心之實驗動物照護委員會規定及批准。
- 本試驗結果顯示，冬蟲夏草發酵液凍乾粉對慢性腎炎發生之前期的腎臟功能指標具有改善之效。
- 尿蛋白濃度變化 圖6及表6為在24小時尿蛋白濃度變化，由試驗期間之結果中可知：腎切除手術後之慢性腎炎動物其尿液中24小時尿蛋白濃度在手術後一個月內開始攀升；經冬蟲夏草發酵液凍乾粉治療的慢性腎炎動物，其24小時尿蛋白濃度則可維持在手術對照組的正常濃度範圍中，此表示冬蟲夏草發酵液凍乾粉具有減緩慢性腎炎動物的24小時尿蛋白濃度攀升之效果。
- 試驗進行期間，動物皆飼養於財團法人生物技術開發中心之大湖區研發用動物房，以一籠一隻、自由飲食飲水之方式飼養。
圖7、手術對照組、腎炎對照組及冬蟲夏草發酵液凍乾粉治療組之腎皮質之蘇木精-伊紅(hematoxylin and eosin，H&E)染色。 製備冬蟲夏草發酵液凍乾粉 冬蟲夏草經深層液態發酵培養後分離得到冬蟲夏草發酵液，冬蟲夏草發酵液經低溫膜過濾濃縮，並將濃縮液冷凍乾燥以得到冬蟲夏草發酵液凍乾粉，製備過程如圖1所示。 傳統中藥材「冬蟲夏草」係指由冬蟲夏草菌寄生於蝙蝠蛾之幼蟲，所長出的子實體與幼蟲蟲體複合體，然而自然界由真菌寄生昆蟲幼蟲形成的菌蟲複合體目前已發現有數十種；近年來，透過分子生物學的研究，利用DNA序列確定Hirsutella 腎切除手術2025 sinensis為冬蟲夏草之無性世代，即菌絲體的菌種。 自古以來應用於『補腎益肺』等，現代臨床研究更顯示冬蟲夏草具多方面健康功效，主要可應用於慢性腎功能衰竭、免疫功能低下、急慢性肝炎、心腦血液循環功能保護、肺炎、肺結核、哮喘、腫瘤輔助治療及糖尿病改善等；但由於其生長環境嚴苛、藥源緊缺、真偽難辨、價格昂貴、且過度採集也使得生態資源遭受破壞，因此若能以人工培養方式培養出與野生種相似的冬蟲夏草，可望滿足市場上的需求、減少生態破壞。 本發明選用衛生署公告之中華被毛孢無性世代菌株輔以深層液態培養技術，培養出與天然野生冬蟲夏草活性成分及功效極為相似之冬蟲夏草菌絲體。
- 一種製備冬蟲夏草發酵液的方法，包含：以冬蟲夏草之無性世代中華被毛孢進行液態發酵；及分離出冬蟲夏草發酵液，並經膜過濾濃縮得到濃縮的冬蟲夏草發酵液。
- 自古以來應用於『補腎益肺』等，現代臨床研究更顯示冬蟲夏草具多方面健康功效，主要可應用於慢性腎功能衰竭、免疫功能低下、急慢性肝炎、心腦血液循環功能保護、肺炎、肺結核、哮喘、腫瘤輔助治療及糖尿病改善等；但由於其生長環境嚴苛、藥源緊缺、真偽難辨、價格昂貴、且過度採集也使得生態資源遭受破壞，因此若能以人工培養方式培養出與野生種相似的冬蟲夏草，可望滿足市場上的需求、減少生態破壞。
- 一種用於治療慢性腎炎之醫藥組合物，其包含一有效劑量之冬蟲夏草發酵液，其中該冬蟲夏草發酵液係由如申請專利範圍第1項所述之方法製備而得。
- 本發明選用衛生署公告之中華被毛孢無性世代菌株輔以深層液態培養技術，培養出與天然野生冬蟲夏草活性成分及功效極為相似之冬蟲夏草菌絲體。
- 數據分析 實驗數據以平均值±標準誤(mean±SEM)方式呈現，並以單向ANOVA方式計算，P值 結果 毒性測試 試驗期間於每週試驗動物體重追蹤記錄(圖2、表2)中，各組別於試驗期間之體重呈現穩定上升之現象；雖然冬蟲夏草發酵液凍乾粉組手術期間(第零天至第十四天)之體重呈現生長停滯之狀態，但手術期過後即呈現穩定上升之體重生長曲線。
- 此結果顯示冬蟲夏草發酵液凍乾粉對慢性腎炎動物之體重生長曲現並無明顯毒性影響。
- 將冬蟲夏草發酵液凍乾粉三組藥物治療組對於實驗動物血清肌酸酐之變化與腎炎對照組相比，可發現於投藥期(第二十一天至四十九天)， 冬蟲夏草發酵液凍乾粉可明顯降低慢性腎炎動物血清肌酸酐之效果，且此降低效果持續至實驗末期。
冬蟲夏草發酵液凍乾粉之每日口服給藥濃度為100 mg/大鼠，溶媒體積為10 mL/kg。 試驗動物 本試驗使用六週齡之雄性SD(Sprague-Dawley)大鼠(購自樂斯科生物科技股份有限公司)，於試驗前預先經一週之檢疫及馴化。 試驗進行期間，動物皆飼養於財團法人生物技術開發中心之大湖區研發用動物房，以一籠一隻、自由飲食飲水之方式飼養。 所有動物照護及試驗皆遵循財團法人生物技術開發中心之實驗動物照護委員會規定及批准。 腎切除手術2025 本發明提供一種製備冬蟲夏草發酵液的方法，包含：以冬蟲夏草之無性世代中華被毛孢進行液態發酵；及分離出冬蟲夏草發酵液，並經膜過濾濃縮得到濃縮的冬蟲夏草發酵液。 腎切除手術 一種製備冬蟲夏草發酵液的方法，包含：以冬蟲夏草之無性世代中華被毛孢進行液態發酵；及分離出冬蟲夏草發酵液，並經膜過濾濃縮得到濃縮的冬蟲夏草發酵液。
本發明亦提供一種用於治療慢性腎炎之醫藥組合物，其包含一有效劑量之冬蟲夏草發酵液，其中該冬蟲夏草發酵液係由前述製備冬蟲夏草發酵液的方法製備而得。 本發明之冬蟲夏草發酵液可降低血中尿素氮及血清肌酸酐、降低尿液尿蛋白/尿液肌酸酐比值並可減緩24小時尿蛋白濃度攀升。 腎切除手術2025 血中尿素氮濃度變化 圖3及表3為每週試驗動物血中尿素氮濃度變化；由結果可知於於腎切除手術後之慢性腎炎動物血中尿素氮濃度遠高於手術對照組，此表示本試驗中的腎切除手術有成功產生慢性腎炎之腎功能損傷。 在冬蟲夏草發酵液凍乾粉治療組於實驗期間中對於實驗動物BUN之變化上顯示出具降低慢性腎炎動物血中BUN之效果。
結論 本試驗結果顯示5/6腎切除手術已成功造成動物慢性腎炎之疾病模式。 在以冬蟲夏草發酵液凍乾粉(100 mg/大鼠)治療的慢性腎炎動物組別中，其腎功能指標在試驗期內可觀測到冬蟲夏草發酵液凍乾粉對於慢性腎炎動物之血中尿素氮、血清肌酸酐、尿液尿蛋白/尿液肌酸酐比值、24小時尿蛋白濃度及組織病理切片具有改善之效。 腎切除手術 本試驗結果顯示，冬蟲夏草發酵液凍乾粉對慢性腎炎發生之前期的腎臟功能指標具有改善之效。 腎切除手術 尿蛋白濃度變化 腎切除手術2025 圖6及表6為在24小時尿蛋白濃度變化，由試驗期間之結果中可知：腎切除手術後之慢性腎炎動物其尿液中24小時尿蛋白濃度在手術後一個月內開始攀升；經冬蟲夏草發酵液凍乾粉治療的慢性腎炎動物，其24小時尿蛋白濃度則可維持在手術對照組的正常濃度範圍中，此表示冬蟲夏草發酵液凍乾粉具有減緩慢性腎炎動物的24小時尿蛋白濃度攀升之效果。
尿液尿蛋白/尿液肌酸酐比值 圖5及表5為在尿液尿蛋白/尿液肌酸酐比值結果，在試驗前、中期(第二十一天至四十九天)之結果中可知：腎切除手術後之慢性腎炎動物其尿液尿蛋白/尿液肌酸酐比值在手術後一個月內開始攀升；經冬蟲夏草發酵液凍乾粉治療的慢性腎炎動物，其尿蛋白/尿液肌酸酐比值皆低於腎炎對照組，此表示冬蟲夏草發酵液凍乾粉具有降低慢性腎炎動物的尿液尿蛋白/尿液肌酸酐比值之效果。 血清肌酸酐濃度變化 圖4及表4為每週試驗動物血清肌酸酐濃度變化；由結果可知於腎切除手術後之慢性腎炎動物血清肌酸酐濃度遠高於手術對照組。 將冬蟲夏草發酵液凍乾粉三組藥物治療組對於實驗動物血清肌酸酐之變化與腎炎對照組相比，可發現於投藥期(第二十一天至四十九天)， 冬蟲夏草發酵液凍乾粉可明顯降低慢性腎炎動物血清肌酸酐之效果，且此降低效果持續至實驗末期。 本發明培養之冬蟲夏草透過菌種鑑定平台、化學分析鑑定平台及生物活性評估平台，確保品質穩定安全、活性成份定性定量，並具一定成效之 調節作用。 實驗結果顯示本發明培養之冬蟲夏草經DNA序列比對與天然冬蟲夏草之無性世代中華被毛孢相似度高達99.82%、HPLC指紋圖譜亦與野生冬蟲夏草相吻合，並於細胞生物活性實驗中明確發現具抑制發炎、抑制HBV病毒、抑制肝癌細胞存活，及抑制動脈硬化發生率等功效。
